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实验笔记丨CRISPR-dCas9实验步骤详解

1、载体酶切 准备灭菌的PCR离心管回收vx秒结白号，配制酶切体系回收vx秒结白号，放置PCR仪，孵育3小时，终止酶切后使用1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。琼脂糖凝胶DNA回收 将吸附柱置于收集管中，加入Buffer BL，离心活化硅胶膜；在紫外灯下，用刀片切下目的条带，尽量去除非目的DNA，确保体积最小。

2、质粒转化通常可通过两种方式实现，分别为电转和接合。通过电转进行质粒转化则需要制备目标菌株的感受态细胞，如何制备非模式菌株的感受态及电转条件摸索是实现高效率转化的关键步骤。接合的方式一般是通过携带打靶质粒的大肠杆菌（如S17）接合至目标菌株，然后进行阳性克隆筛选。

3、这里我们先前已经完成： CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA设计 输入目标基因组DNA序列 我们提供在线CRISPR设计工具（ http：//tools.genome-engineering.org ） 可以输入序列（例如，来自目的区域的一个1KB基因片段），识别和排列合适的靶位点，计算预测每个指定靶标的off-target位点。

4、转染步骤包括：消化细胞、添加含polybrene的培养基，4小时后稀释polybrene，培养12-36小时后收集和处理，接着在基质胶中铺板并固化，再进行药物筛选。每个步骤都旨在确保转染的准确性和类器官的活性。总的来说，crispr-cas9技术和慢病毒转染为类器官研究提供了强大的工具，但操作过程中需细致谨慎。

几号白露2023

年白露是农历七月廿四。关于“处暑十八合白露勿露身”的解释如下：含义：这句话的意思是，在处暑节气之后大约十八天，就到了白露节气，此时不宜再赤膊露体，以免着凉。原因：白露时节，气温逐渐下降，昼夜温差增大，冷气逐渐加重，清晨的露水随之日益加厚。如果此时再赤膊露体，很容易因为温差大而着凉。

年白露节气是在公历2023年09月08日，星期五，农历七月廿四。在白露节气，有以下几点需要注意：气温变化：进入白露后，天气逐渐转凉，昼夜温差增大，一场秋雨一分凉，要注意根据天气变化及时添加衣物，以防着凉感冒。

年白露是农历七月廿四，星期五。关于全国各地白露的习俗，主要有以下几点：祭禹王：在某些地区，人们会在白露节气时举行“祭禹王”的活动，以表达对大禹治水功绩的敬仰和感激。吃龙眼：在福建福州地区，有“白露必吃龙眼”的传统习俗，认为吃龙眼有助于身体健康。

年白露时间：9月8日5点26分31秒，星期五，农历七月廿四。白露是秋季的第三个节气，属于孟秋时节的结束和仲秋时节的开始，也就是开始进入秋天中期。这个时候夏季的暑热才是真正消散，寒气渐深，温差变大。

天猫超市卡怎么退

在天猫超市的界面中，点击我的。在我的界面中，点击客服小蜜。在服务大厅的界面中，点击天猫超市客服。在天猫超市客服的界面中，点击输入框。在输入框的界面中，输入退猫超卡。在天猫超市客服的界面中，点击此处 在天猫优购的界面中，点击猫超卡退卡即可。

天猫超市卡是不可以退的。以下是关于天猫超市卡及退货退款的相关说明回收vx秒结白号：天猫超市卡不可退回收vx秒结白号：一旦购买天猫超市卡，该卡便不支持退卡操作。可退商品：通过天猫超市卡购买的商品，如果不满意可以申请退货或退款。退款方式：退货或退款成功后，金额将直接转到天猫超市卡之中，不支持退还现金至支付宝账户。

天猫超市充值的钱在一定条件下是可以退的，具体退款方式如下： 天猫超市卡退款： - 如果购买的是天猫超市卡且尚未激活，可以向平台提出退款申请，购买卡时的金额会直接退回到账户中。

天猫超市卡在一般情况下是不支持退款的，除非遇到特殊情况如卡片未激活或存在质量问题等。如果确实需要尝试退卡，建议首先联系天猫客服说明情况，按照客服指导进行操作。通常来说，购买前需仔细阅读相关条款以了解具体政策。

天猫超市卡一般不可以退，但可以通过一些特定途径进行回收变现。天猫超市卡属于电子购物卡，仅限在天猫超市内消费使用，不支持提现和运费抵扣。如果绑定了淘宝账号，就不能再进行退卡操作。

如何把淘宝的黑号变白号了?

商家需要详细查看淘宝规定，找出可能触发黑号的违规行为，并进行整改。提供证明材料： 商家可以准备相关证明材料，如商品真实性证明、售后服务证明等，向淘宝客服提交，以证明自己的经营行为是合法的。与客服沟通： 主动与淘宝客服取得联系，说明整改情况，提供证明材料，并请客服协助尽快解封账号。

淘宝黑号转白号的方法其实挺简单的，就是不要参加或者违法活动，然后正常购物，一年之内就可以转白。淘宝黑号官方是没有具体规定的，如果想要恢复需要一系列操作，一般情况下黑号是无法进行恢复的。淘宝变成黑号后，无法领取优惠券，秒杀活动也无法参加，积分也会变得比较少。

如果黑号是由于频繁下白菜单、使用花呗和余额宝支付、购物行为评价不佳等原因造成的，那么可以尝试在有刚需大额订单的时候用黑号下，争取变白号。同时，多用余额宝和花呗支付也有助于提高账号的信誉度。

淘宝黑号变白的方法并不固定，因为淘宝的系统算法和规则随时在变化。但通常，要洗白一个淘宝黑号，用户需要改善自己在淘宝平台上的行为，提升信用度，并尝试与淘宝客服沟通解决问题。以下是一些建议性的步骤：首先，用户应该检查自己是否存在违规行为。

方法如下：申诉解封。首先联系淘宝客服，阐述相关情况和申诉理由，如账户被误封，提供详细的账号信息、购买记录以及相关证据，向淘宝解释清楚自己的行为并承诺改正错误。同时，建议附上一些客服能够看得到的证据，如快递单号、支付宝订单等，以增加申诉的可信度。了解淘宝黑号的形成原因。

方法一：对于目前还是白号，要好好珍惜，不要老是用这个号去下白菜单！多用余额宝和花呗支付，对号有利。已经是黑号，在有刚需大额订单的时候，用黑号下，争取变白号。在天猫会员页面有个购物行为评价，留意下星级变化，越高越好。不建议使用软件特容易被发现。